Aplicación de la herramienta de edición genética CRISPR-Cas9 para la generación de grandes deleciones en el genoma Streptomyces rimosus

Abstract

Mediante la aplicación de la técnica de CRISPR-Cas9 se ha conseguido la deleción de fragmentos de ADN de 245 kpb a 450 kpb del cromosoma de la cepa productora de oxitetraciclina, Streptomyces rimosus ATCC 10970. Estas deleciones afectaron a la misma región de un extremo del cromosoma que, según el análisis bioinformático, contiene varios agrupamientos genéticos que codifican para enzimas implicadas en la biosíntesis de metabolitos secundarios. La generación de grandes deleciones en esta parte del cromosoma de S. rimosus probablemente hará que las cepas modificadas sean más robustas, reduciendo de esta forma la inestabilidad morfológica y genética. Para ello, mediante diferentes procedimientos de clonación se ensamblaron 3 construcciones en Escherichia coli de plásmidos que contenían la maquinaria CRISPR-Cas9, para posteriormente ser introducidas independientemente en S. rimosus usando técnicas de conjugación, para conseguir las deleciones correspondientes. A pesar de las grandes deleciones generadas, los clones modificados de S. rimosus seguían manteniendo la morfología de la cepa original de referencia, pudiendo representar atractivas factorías de células microbianas para la producción de diferentes metabolitos.