Desarrollo de un ensayo funcional in vitro para detectar anticuerpos con actividad agonista

Authors

  • Marta Martínez López

DOI:

https://doi.org/10.18002/ambioc.i21.8185

Keywords:

Bioensayo (in vitro), BTLA, HVEM, Inmunoterapia, R, Linfocito T, Receptor co-inhibidor

Abstract

Los bioensayos funcionales in vitro son fundamentales para la correcta caracterización de medicamentos biológicos como los inhibidores de los puntos de control inmunitarios (ICI). Estos ICI pueden bloquearse mediante anticuerpos que impiden la transmisión de señales coinhibitorias, permitiendo, de esta manera, una respuesta inmunitaria más efectiva contra las células cancerígenas. En este trabajo, se ha puesto a punto un bioensayo in vitro para activar los linfocitos T, a través del correceptor del TcR (CD3), sin la necesidad de antígeno, y evaluar el impacto de la interacción entre HVEM (mediador de entrada del virus del herpes) y BTLA (atenuador de linfocitos B y T) en esta activación. El bioensayo consiste en la realización de un cocultivo entre unas células estimuladoras (línea celular CHO modificada genéticamente para la expresión del gen que codifica para scFv anti-CD3) y como células respondedoras, la línea celular Jurkat TPR, que expresa tres factores de transcripción unidos a tres fluorocromos diferentes (mCherry, CFP y eGFP: unidos a AP-1, NF-kB y NFAT respectivamente), con el objetivo de estudiar su activación mediante citometría de flujo. Durante el trabajo se ha realizado el clonaje de la proteína BTLA y la posterior transducción en las células Jurkat TPR. A continuación, se realizaron los bioensayos en los que se demostró que funcionaban activando los linfocitos T, sin necesidad de presentar antígeno y detectando los fluorocromos mediante citometría de flujo. Mediante este ensayo, comprobamos que la interacción BTLA-HVEM disminuye la activación de las células T y, el bloqueo de este ICI mediante anticuerpos anti-HVEM, aumentaba la respuesta de las células Jurkat TPR respondedoras. En conclusión, hemos desarrollado un sistema experimental in vitro que permite estudiar interacciones ligando/receptor en el contexto de la activación de las células T, para aumentar o reprimir la función de las mismas.

Downloads

Download data is not yet available.

References

Alcover, A., Alarcón, B. y Di Bartolo, V. 2018. Cell biology of T cell receptor expression and regulation. Annual Review of Immunology, 36: 103–125.

Battin, C., Leitner, J., Waidhofer-Söllner, P., Grabmeier-Pfistershammer, K. et al. 2022.

BTLA inhibition has a dominant role in the cis-complex of BTLA and HVEM. Frontiers in Immunology, 13: 956694.

Becton, Dickinson & Co. 2002. FlowJoTM Software (Versión 10.0.7) [Programa de ordenador] Disponible en: https://www.flowjo.com/solutions/flowjo/downloads (Accedido: 10 de abril de 2023).

BioRender. 2023. BioRender. Disponible en: https://www.biorender.com (Accedido: 21 de junio de 2023).

Bonilla, F.A. y Oettgen, H.C. 2010. Adaptive immunity. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 125(2): S33–S40.

De Sousa Linhares, A., Leitner, J., Grabmeier-Pfistershammer, K. y Steinberger, P. 2018.

Not all immune checkpoints are created equal. Frontiers in Immunology, 9: 1909.

del Rio, M.L., Kurtz, J., Perez-Martinez, C., Ghosh, A. et al. 2011. B- and T-lymphocyte attenuator targeting protects against the acute phase of graft versus host reaction by inhibiting donor anti-host cytotoxicity. Transplantation, 92(10): 1085–1093.

del Rio, M.-L., Jones, N.D., Buhler, L., Norris, P. et al. 2012. Selective blockade of herpesvirus entry mediator–B and T lymphocyte attenuator pathway ameliorates acute graft-versus-host reaction. The Journal of Immunology, 188(10): 4885–4896.

Esensten, J.H., Helou, Y.A., Chopra, G., Weiss, A. et al. 2016. CD28 costimulation: from mechanism to therapy. Immunity, 44(5): 973–988.

Jutz, S., Leitner, J., Schmetterer, K., Doel-Perez, I. et al. 2016. Assessment of costimulation and coinhibition in a triple parameter T cell reporter line: simultaneous measurement of NF-κB, NFAT and AP-1. Journal of Immunological Methods, 430: 10–20.

Pasero, C. y Olive, D. 2013. Interfering with coinhibitory molecules: BTLA/HVEM as new targets to enhance anti-tumor immunity. Immunology Letters, 151(1-2): 71–75.

Published

2024-01-16

How to Cite

Martínez López, M. (2024). Desarrollo de un ensayo funcional in vitro para detectar anticuerpos con actividad agonista. Ambiociencias, (21), 83–91. https://doi.org/10.18002/ambioc.i21.8185

Issue

Section

Siguiendo la pista